Celthy SureXcel 3000转染“神操作”:原代+神经干细胞超高转染成功率!
- 2026-03-30 17:28:35
原代细胞和神经干细胞的转染是细胞实验一大难题，主要原因在于这两种细胞对于试剂毒性十分敏感，且分裂缓慢、体外状态脆弱，使得核酸转染十分困难。与其他细胞（如永生化细胞系）相比，它们对常规转染试剂的耐受性差，且转染后容易发生分化或凋亡，因此需要更精细优化的转染策略。
Arcegen推出由新型多聚体高分子材料开发的升级版核酸转染试剂：Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010），采用阳离子多聚体高分子材料替代传统脂质体，并具有独特的核酸保护机制，在保证核酸转染成功率的同时，将细胞毒性降到最低，能够满足各种转染需求，全核酸转染通用，已在多种细胞中得到验证。
Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010）已被证实可以高效转染多种原代和神经干细胞
一、客户案例
01
原代猪肺泡巨噬细胞
核酸：质粒DNA（8000bp）。
孔板：6孔板。
核酸用量：2.5 μg。
转染试剂用量：5 μL。
（案例来源：中山大学）
02
小鼠原代成纤维细胞
竞品T*3000 Celthy SureXcel 3000
核酸：质粒DNA（6162bp）。
孔板：12孔板。
核酸用量：1 μg。
转染试剂用量：2 μL。
（案例来源：山东大学）
03
小鼠肝脏原代细胞
Celthy SureXcel 3000 竞品T*3000
核酸：质粒DNA（9500bp）。
孔板：3.5 cm皿。
核酸用量：0.5 μg。
转染试剂用量：1 μL。
（案例来源：清华大学）
04
小鼠原代神经干细胞
竞品T*3000 Celthy SureXcel 3000
核酸：mDNA。
孔板：96孔板。
核酸用量：20 ng。
转染试剂用量：0.1 μL。
（案例来源：汕头大学）
05
原代皮肤成纤维细胞
Celthy SureXcel 3000
核酸：质粒DNA（2112bp）。
孔板：6孔板。
核酸用量：2.5 μg。
转染试剂用量：5 μL。
（案例来源：复旦大学附属中山医院）
06
原代人肺动脉内皮细胞
核酸：质粒DNA（967bp）。
孔板：24孔板。
核酸用量：1 μg。
转染试剂用量：2.5 μL。
（案例来源：广东省人民医院）
以上细胞都是用Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010）转染成功的。接下来我们就来看看具体如何用Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010）对这些细胞进行转染吧！
二、实验步骤
一、实验前准备
细胞状态：复苏后≤10代，转染当天汇合度70-90 %，无分化迹象（圆形、伪足少）。
培养基：DMEM高糖＋10 % FBS＋1 % P/S。
质粒：高纯度、无内毒素，浓度≥1000 ng/μL。
试剂耗材：Celthy SureXcel 3000转染试剂、Opti-MEM™ 减血清培养基、6孔板（或24孔板，按比例缩放）。
二、细胞准备（以6孔板单孔为例，其他规格线性换算）
细胞接种（前18-24h）：按5-8×10⁵ cells/孔铺板，加2 mL完全培养基，过夜培养至70-90 % 汇合。
转染前1-2h：将培养基换成1.75 mL无抗生素完全培养基，可含血清。
三、转染复合物配制
配制SureXcel 3000-DNA复合物
A 管（SureXcel 3000）：125 μL Opti-MEM+7.5 μL SureXcel 3000，轻弹混匀。
B 管（DNA）：125 μL Opti-MEM+2.5 μg 质粒 DNA+7.5 μL增强剂（2 μL/μg DNA），轻弹混匀。
合并：将稀释的质粒加入稀释的转染试剂中，室温静置10-15 min，形成复合物。
四、转染
将250 μL复合物均匀滴入孔中，前后左右轻摇培养板；37℃、5 % CO₂孵育。
因原代和神经干细胞较为脆弱，通常孵育6-8 h后，若细胞状态较差，可更换新鲜培养基；若细胞状态良好，可以不用换，直至后续表达检测。
五、基因表达检测
1) 24-48 h后荧光显微镜/流式检测瞬时表达；
2) 如需稳定转染，24 h后加入嘌呤霉素（1-2 μg/mL）加压筛选，7-10 d换液。
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